تشمل الطرق الأربعة الرئيسية للتحليل الميكروبي قياس النمو والعد الميكروبي والمؤشر الفسيولوجي والفحص المجهري للطاخة.
قياس النمو
قياس الحجم: تنعكس حالة نمو الكائنات الحية الدقيقة عن طريق قياس كمية الواصلة في حجم معين من وسط الثقافة. هذه الطريقة بسيطة وسريعة ولكن الخطأ فيها كبير.
طريقة الوزن الجاف: يتم تحديد الوزن الجاف للكائنات الحية الدقيقة عن طريق الطرد المركزي أو الترشيح. هذه الطريقة أكثر تعقيدًا وتستخدم عادةً عندما يكون المنتج الميكروبي عبارة عن خلية بكتيرية، مثل الخميرة الجافة والأعلاف وما إلى ذلك.
قياس التعكر: يتم قياس قيمة الامتصاص عند طول موجي معين بواسطة مقياس الطيف الضوئي فوق البنفسجي لتحديد حالة نمو الكائنات الحية الدقيقة. تستخدم هذه الطريقة بشكل أساسي لمراقبة نمو البكتيريا في صناعة التخمير.
قياس طول الميسليوم: بالنسبة للفطريات الخيطية وبعض الفطريات الشعاعية، يمكن قياس طول نمو الواصلة خلال فترة زمنية معينة على وسط الاستزراع.
طريقة العد الميكروبي
طريقة عداد الكريات: بسيطة وبديهية وسريعة، ولكنها مناسبة فقط لحساب الجراثيم التي تنتجها الكائنات الحية الدقيقة وحيدة الخلية أو الكائنات الحية الدقيقة الخيطية، وتشمل النتائج البكتيريا الميتة والحية23.
طريقة حساب الصبغ: استخدم الأصباغ مثل الأحمر المحايد وأزرق التريبان وأزرق الميثيل لتمييز الخلايا الميتة عن الخلايا الحية.
طريقة تخفيف السائل: إجراء تخفيف تسلسلي بعشرة أضعاف للعينة البكتيرية غير المعروفة، وتسجيل عدد أنابيب الاختبار مع النمو عند كل تخفيف بعد الاستزراع، ثم حساب محتوى البكتيريا الحية بناءً على مضاعف التخفيف للعينة. هذه الطريقة أكثر تعقيدًا، ولكن يمكن حساب عدد البكتيريا الحية.
طريقة حساب مستعمرة الصفيحة: قم بتوزيع المحلول البكتيري المخفف على وسط استنبات صلب، وحساب عدد البكتيريا في المحلول البكتيري الأصلي بعد الاستنبات. يمكن لهذه الطريقة الحصول على معلومات عن البكتيريا الحية، لكن العملية مرهقة وتتطلب قدرًا معينًا من وقت الاستزراع.
طريقة المؤشر الفسيولوجي
تحديد محتوى النيتروجين: محتوى النيتروجين لمعظم البكتيريا هو 12.5% من الوزن الجاف. يمكن أن تنعكس حالة نمو الكائنات الحية الدقيقة بشكل غير مباشر عن طريق قياس محتوى النيتروجين.
تحديد محتوى الكربون: استخدم محلول K2Cr2O7 لقياس الامتصاص عند طول موجي محدد، وارسم منحنى قياسي لحساب كمية النمو.
طريقة تحديد السكر المختزل: تعكس حالة نمو الكائنات الحية الدقيقة عن طريق قياس كمية السكر المختزل، والذي غالبًا ما يستخدم في إنتاج التخمير الصناعي على نطاق واسع.
تحديد المواد الفسيولوجية الأخرى: بما في ذلك الحمض النووي وATP والمحتويات الأخرى، بالإضافة إلى إنتاج الأحماض وإنتاج الغاز واستهلاك الأكسجين وإنتاج الحرارة وغيرها من المؤشرات.
مسحة المجهر
الفحص المجهري اللطاخة هو وسيلة لفحص البكتيريا وعلم الخلايا والبكتيريا الإنزيمية والميكروفيلاريا وبلورات الكوليسترول. من خلال تحضير المسحات ومراقبتها تحت المجهر، يمكن فهم شكل الكائنات الحية الدقيقة وبنيتها بشكل حدسي
